Значимым событием 2012–2013 гг. стала регистрация нового показания к применению отечественного препарата Рефнот® для иммунотерапии онкологических больных. Рефнот® – рекомбинантный препарат фактора некроза опухоли альфа в комбинации с тимозином альфа-1. Он уникален по своему строению и обладает оригинальным механизмом действия. Препарат положительно влияет на содержание Т-лимфоцитов, активирует природные киллеры, обладает значительным эффектом на компоненты противоопухолевого и неспецифического иммунитета, обеспечивающие коррекцию и стимуляцию иммунитета у онкобольных.

Доклинические исследования Рефнота были проведены в РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН и Научно-исследовательском центре токсикологии и гигиенической регламентации биопрепаратов. I–III фазы клинических исследований проводились в РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, II и III фазы – также в НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова. В декабре 2012 г. после проведенных исследований регистрация Рефнота была расширена и он был зарегистрирован в качестве иммуномодулятора для онкологических больных.

Впечатляют данные, полученные при использовании Рефнота в сочетании с современной цитостатической химиотерапией при диссеминированной меланоме кожи, свидетельствующие об увеличении частоты полных и частичных ремиссий. Доказаны иммуномодулирующие эффекты Рефнота. Установлено, что Рефнот® может применяться длительно, не вызывая клинически значимых побочных эффектов.

На основании полученных клинических данных можно утверждать, что Рефнот® усиливает эффективность химиотерапии. Так, при лечении диссеминированной меланомы кожи под его влиянием отмечается увеличение частоты полных эффектов; у значительного числа больных наблюдается также длительная стабилизация болезни – в течение 6 месяцев и более. Контроля болезни (полный и частичный эффект + длительная стабилизация) удалось достигнуть в 54,5 % случаев. Особенно необходимо подчеркнуть эффективность Рефнота для пациентов, исчерпавших возможности стандартной лекарственной терапии. Длительная стабилизация болезни зарегистрирована в 28,6 % случаев.

Иммунологические эффекты Рефнота доказаны и при его самостоятельном применении.

При применении Рефнота в сочетании с химиотерапией препарат вводится до каждого курса химиотерапии в течение 2–4 недель подкожно в дозе 100 тыс. ЕД 1 раз в день, 1–5-й дни, затем 2 дня перерыв, или в дозе 400 тыс. ЕД 1 раз в сутки 3 раза в неделю.

При самостоятельном использовании Рефнот® вводится подкожно в дозе 100 тыс. ЕД 1 раз в день, 1–5-й дни, затем 2 дня перерыв, длительно.

Рефнот® представляет собой комплекс рекомбинантного фактора некроза опухолей α и тимозина α-1, состоящий из 185 аминокислотных остатков, последние 28 из которых на С-конце являются последовательностью тимозина α-1. Это уникальное соединение – гибридная молекула двух биологически активных агентов: цитокина фактора некроза опухолей и гормона тимозина.

Как известно, Т-лимфоциты играют ключевую роль в противоопухолевом иммунитете. Они также участвуют в реакциях гуморального иммунитета, т. к. для продукции антител к большинству антигенов В-клеткам необходимо взаимодействие с Т-клетками-хелперами (это в основном CD4+- Т-лимфоциты). В противоопухолевом иммунитете существенную роль играют также лимфоциты – естественные киллеры (NK), не относящиеся ни к Т-, ни к В-лимфоцитам. Большое значение придается обнаружению их роли в антиметастатическом действии иммунной системы при злокачественных опухолях. Было изучено воздействие Рефнота на различные субпопуляции Т-лимфоцитов, а также на количество и активность NK-клеток. Применялся метод проточной цитофлюориметрии с использованием широкого спектра моноклональных антител: CD3, CD5, CD7, CD4, CD8, CD4/CD8, HLA-DR, CD38, CD25, CD50, CD16, CD11b, CD20, CD95, CD45RA, CD71, CD4+CD25+, CD28, CD8+, CD28+, CD8+CD28-, FOXP3. Использован высокочувствительный полуавтоматический МТТ-тест для оценки цитотоксической противоопухолевой активности NK-клеток, проведено определение в сыворотке крови концентраций иммуноглобулинов G, A и M.

Иммунологическое тестирование

проведено до и после 2–4 курсов терапии Рефнотом. У 81 % больных исходно было отмечено существенное снижение количества CD4+-клеток – в среднем до 25,57 % от общей популяции лимфоцитов (норма – 36–45 %).

В результате лечения Рефнотом их число возросло до 34,1 % после 2- и до 34,5 % после 4-недельного курса.

Количество CD8+-лимфоцитов было нарушено у 87 % больных – из них у 24 % оно было ниже, у 46 % – выше нормы, равной 25–30 %. Лимфоциты с фенотипом CD8+ представляют собой неоднородную популяцию, включающую как эффекторные цитотоксические клетки, участвующие в элиминации опухолевых клеток, так и клетки-супрессоры, угнетающие иммунные реакции. Поэтому как снижение, так и повышение их количества или активности в равной мере нежелательны. Лечение Рефнотом в течение 2 недель привело к возрастанию процентного количества этих клеток у тех больных, для которых он был снижен, до нормального уровня. Известно, что некоторая часть CD8+-клеток является клетками-супрессорами: у больных с исходно повышенным их содержанием оно снизилось до нормального уровня (рис. 1).

Соответственно изменениям в числе CD4+- и CD8+-клеток изменялось и соотношение этих клеток – иммунорегуляторный индекс CD4/CD8. Исходно он был снижен у 52 % больных, составив в среднем для этой группы 0,78 при норме 1,2–2,4. После 2 и 4 недель лечения Рефнотом он повысился до 1,19 и 1,3 соответственно (рис. 2).

Особый интерес представляет воздействие Рефнота на количество и цитотоксическую активность NK-клеток (CD16-клетки). Их количество исходно было снижено и составило 7,4 % при норме от 10 до 20 %, а активность NK-клеток была снижена у 10,8 % больных при норме 25–50 %. Лечение Рефнотом повысило количество CD16-клеток и активность NK-клеток в группе больных с исходным снижением этих показателей. При этом необходимо отметить, что Рефнот® практически не изменял количество CD16-клеток у больных с исходно нормальным их показателем, однако существенно усиливал их цитотоксическую активность (активность NK-клеток) – с 40,2 до 61,9 % – после 2 недель и до 54,1 % после 4 недель лечения (рис. 3). Это свидетельствует о том, что лечение Рефнотом повышало цитотоксический и противоопухолевый потенциал NK-клеток без увеличения их количества.

В целом анализ показателей иммунного статуса выявил:

• у больных с прогрессированием заболевания до применения Рефнота отмечено низкое соотношение CD4+/CD8+-клеток. При регрессе метастазов или длительной стабилизации опухолевого процесса соотношение CD4+/CD8+-клеток повышается уже после первого курса Рефнота;
• у большинства больных с прогрессированием болезни при нормальном или высоком количестве CD16+-клеток (NK-клеток) их активность снижена, в то время как для больных с положительным лечебным эффектом более характерно нормальное или даже существенно сниженное количество CD16+-клеток при высокой их активности, что свидетельствует о более высоком цитолитическом потенциале этих клеток. В этой группе пациентов чаще достигался противоопухолевый эффект.

В целом результаты проведенных исследований продемонстрировали уникальные иммуномодулирующие свойства Рефнота у онкологических больных. Его отличие от других известных иммуномодуляторов заключается в положительном воздействии одновременно на две клеточные популяции – Т- и NK-клетки, являющиеся ведущими компонентами противоопухолевого иммунитета.

Рефнот® рекомендуется для самостоятельного использования и в сочетании с цитостатическими лекарственными средствами больным злокачественными опухолями в качестве иммуномодулятора.

Планируется проведение новых исследований по углубленному изучению Рефнота на онкологических больных, будут изучены новые механизмы действия этого препарата – влияние на ангиогенез и др. Дальнейшее изучение Рефнота позволит получить новые фундаментальные знания об иммунитете у онкологических больных и расширит возможности эффективного лечения при различных злокачественных опухолях.

Таким образом, создан принципиально новый, высокоэффективный отечественный стимулятор иммунитета для лечения больных злокачественными опухолями, который может быть рекомендован к применению в клинической онкологии.