SEROLOGICAL METHODS FOR THE DIAGNOSTICS OF CHLAMIDIAL PROSTATITIS


DOI: https://dx.doi.org/10.18565/pharmateca.2018.s5.43-47

V.A. Molochkov (1), Yu.V. Molochkova (1), E.V. Antonova (2), Т.А. Skirda (3)

1 Department of Dermatovenereology and Dermatooncology, MRSRCI n.a. M.F. Vladimirsky, Moscow, Russia; 2 Shchelkovo Dermatovenerologic Dispensary, Shchelkovo, Russia; 3 G.N. Gabrichevsky Moscow Research Institute for Epidemiology and Microbiology, Moscow, Russia
Background. The diagnosis of chronic urogenital chlamydiosis (UGC) is complex due to its asymptomatic course, as well as the high frequency of false-negative results of molecular-biological tests, including in consequence of inaccessible localization of the pathogen in ascending infection. For this reason, after receiving negative results the doctor should not regard them as an absolute indicator of the absence of chlamydial infection and consider the potentials of indirect serological tests. Objective. Evaluation of the use of a serological test complex for the detection of antichlamydial antibodies in patients with chronic prostatitis. Methods. During the period from 2015 to 2018, 39 patients with chronic prostatitis were examined in the Shchelkovo Dermatovenerologic Dispensary (Moscow region). For the purpose of diagnosis, clinical instrumental molecular-biological and serological tests were conducted. Results. Of the 39 patients examined, chlamydial infection was not detected by PCR and ELISA in 13 (33.3%), in 26 (66.7%) patients it was detected by PCR or serologically, of which in 6 (23.1%) patients C. trachomatis was detected by the PCR method, in 20 (76.9%) – by serological method. Conclusion. The data obtained allow to conclude that it is necessary to supplement the standard diagnostic methods by determining secretory IgA to C. trachomatis of seminal plasma and serum IgG antibodies to the HSP-60, as elevated levels of the latter indicate a persistent chlamydial infection.
Keywords: chronic prostatitis, diagnosis, molecular-biological analysis, serologic examination, secretory IgA

Введение

Урогенитальный хламидиоз (УХ) относится к наиболее распространенным инфекциям, передаваемых половым путем (ИППП), поражающим мужчин, женщин и детей, включая новорожденных, негативно влияет на репродуктивное здоровье, служит частой причиной бесплодия и имеет важное медицинское и социально-экономическое значение. По оценке Всемирной организации здравоохранения, в мире ежегодно регистрируется около 100 млн новых случаев УХ. При этом частота УХ недооценивается в связи с мало- и бессимптомностью течения, а также в связи со сложностью выявления этой инфекции, тем самым создается резервуар для ее дальнейшего распространения [1]. Лечение УХ, который, как правило, выявляется в хронической стадии и поэтому практически всегда является осложненным, недостаточно эффективным. К хронической инфекции может приводить неадекватная терапия свежей (существующей до 2 месяцев) инфекции.

Диагностика свежего УХ не представляет трудностей и проводится молекулярно-биологическими методами: полимеразной цепной реакцией (ПЦР), амплификацией молекул рибосомальной РНК (NASBA), занимающими лидирующее место среди прямых методов выявления возбудителя вследствие высокой чувствительности и специфичности (80–100%). Сложность в диагностике обусловленных УХ хронических осложненных мочеполовых поражений связана как с топическими особенностями таких поражений, так и с выявлением Chlamydia trachomatis. При этом интерпретация результатов лабораторных исследований требует от врача максимального внимания, грамотного и осмысленного подхода к их оценке [2].

Диагностика хронического УХ сложна в связи с его бессимптомным течением, а также высокой частотой ложноотрицательных результатов молекулярно-биологических тестов, в т.ч. вследствие недоступной локализации возбудителя при восходящей инфекции. Однако отрицательный результат такой диагностики не должен расцениваться врачом как свидетельствующий об отсутствии хламидийной инфекции. И в таких случаях предпочтение отдается косвенным серологическим тестам. Исследования на определение специфических антител к родоспецифическому липополисахаридному (ЛПС) антигену хламидий (Ch. рsittaci, Ch. рneumoniae, Ch. trachomatis) позволяют установить инфицированность этими разновидностями хламидий: они появляются в крови раньше, чем к белковому антигену, и снижаются быстрее [3]. В то же время этот тест не дает информации о том, каким видом хламидий вызвано настоящее заболевание.

Видоспецифическое серологическое исследование проводится с определением титра антител классов IgG и IgA к C. trachomatis. Обнаружение антител классов IgG и IgA одновременно в крови обследуемого свидетельствует об активной фазе инфекционного процесса [4]. Наличие антител класса IgG свидетельствует о ранее перенесенной или протекающей в данный момент инфекции. Выявление антихламидийных антител класса IgA – более информативный тест для диагностики свежего воспалительного процесса [5, 6].

Определение антител класса IgG к белку теплового шока Ch. trachomatis (БТШ-60) характеризует персистирующее течение хламидиоза. Появление антител к HSP-60 Ch. trachomatis приводит к тому, что иммунный ответ на другие антигены, в частности на наружный мембранный антиген (major outer membrane protein, МОМР) и ЛПС, снижается, но продолжается синтез антител к БТШ-60 хламидий. Возможно, иммунный ответ на БТШ-60 хламидий устраняет толерантность организма к собственным БТШ, что приводит к развитию аутоиммунных реакций [7].

Секреторные IgA к Ch. trachomatis служат результатом местного иммунного ответа на уровне слизистых оболочек, они появляются сначала в семенной плазме или вагинальном отделяемом и являются маркером местного воспалительного процесса [8]. Семенная плазма является предпочтительным образцом для диагностики бессимптомной хламидийной инфекции у мужчин. Эти исследования приобретают особое значение при отрицательных результатах обследования на хламидии методами молекулярной биологии [9] и имеют важное значение для выявления хламидийного простатита [10].

Целью настоящего исследования стала оценка использования комплекса серологических исследований для определения противохламидийных антител у больных хроническим простатитом.

Методы

За период с 2015 по 2018 г. в Щелковском кожно-венерологическом диспансере (Московская область) нами были обследованы 39 пациентов с диагнозом «хронический простатит».

Клиническое обследование включило сбор анамнеза, осмотр мочеполовых органов (включая пальцевое исследование предстательной железы, семенных пузырьков, куперовых желез и т.д.). Инструментальное обследование – сухую тотальную уретроскопию, а также ультразвуковое исследование предстательной железы и семенных пузырьков проводили в отделении дерматологии и дерматоонкологии МОНИКИ.

Все пациенты подверглись молекулярно-биологическому (полимеразная цепная реакция [ПЦР] в реальном времени) исследованию материала из уретры на уретрогенные ИППП. Комплексное серологическое исследование проведено в клиническом диагностическом Центре института эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского с использованием метода иммуноферментного анализа (ИФА) в четырех тест-системах фирмы Medac (Германия): к родоспецифическому ЛПС хламидий, основному белку наружной мембраны МОМР Ch. trachomatis, БТШ-60 Ch. trachomatis, секреторного IgA в семенной плазме. Всего проведено 273 исследования в 4 тест-системах ИФА.

Положительным результатом считались титры антител к родоспецифическому ЛПС хламидий: IgM ≥1:50, IgG ≥1:100, IgA ≥1:50; к МОМР Ch. trachomatis: IgG ≥1:50, IgA ≥1:50; к БТШ-60 Ch. trachomatis IgG ≥1:50; секреторного IgA в семенной плазме ОП >Cut off, где ОП – оптическая плотность, полученная при тестировании исследуемого образца, cut off – граничное значение (средняя ОП отрицательных контролей +0,05). Использование четырех тест-систем считали обоснованным, поскольку каждая имела свою диагностическую значимость.

Результаты

Как видно из табл. 1, у 13 (33,3%) пациентов хламидийная инфекция не была выявлена и методом ПЦР, и ИФА, у 26 (66,7%) она была диагностирована методом ПЦР или серологически, при этом у 6 (23,1%) пациентов Ch. trachomatis методом ПЦР были выявлены, у 20 (76,9%) не были выявлены. Сыворотки 20 пациентов с отрицательным результатом ПЦР были исследованы в тест-системе ИФА с определением специфических ЛПС антител к роду хламидий, позволяющей определить инфицированность хламидиями. При этом 5 (25%) больных оказались серонегативными, у 1 (5%) были выявлены антитела классов IgM; антитела классов IgG и/или IgA определены у 14 (70%) пациентов.

Выявление антител классов IgM и IgA свидетельствовало об активной хламидийной инфекции, IgG, IgA – о хронической активной инфекции и только IgG – о перенесенной ранее инфекции (табл. 2, 3).

Проведение видовой диагностики 20 пациентов с определением антител IgG, IgA к Ch. trachomatis позволило выявить лишь 2 (10%) пациентов с антителами классов IgG и IgA (IgG 1:50 и IgA 1:50; и IgG 1:200 и IgA 1:200), 3 (15%) пациентов с IgG (IgG у всех четырех в титре 1:50), у 15 (75%) пациентов специфические антитела не выявлены (серонегативные пациенты). При этом к роду хламидий лишь 5 (25%) пациентов были серонегативными, у остальных определены антитела в разных сочетаниях.

Обследование 20 пациентов на антитела класса IgG к БТШ-60 выявило их наличие в 11 (55%) случаях (титр варьировался от 1:50 до 1:200), в 9 (45%) они отсутствовали (табл. 2, 3). Секреторные IgA к Ch. trachomatis в семенной плазме присутствовали у каждого из 20 пациентов, причем их обнаружение у 11 (55%) с наличием антител к БТШ-60 указывало на персистирующую хламидийную инфекцию с местным воспалительным процессом в предстательной железе. У 9 (45%) пациентов антитела класса IgG к БТШ-60 Ch. trachomatis не были выявлены, но при этом у каждого из них определены секреторные IgA к Ch. trachomatis, что свидетельствовало о местном воспалительном процессе, специфические же антитела IgG к Ch. trachomatis выявлены у одного пациента в титре 1:50, у 8 они отсутствовали.

Обсуждение

Таким образом, при обследовании 20 пациентов с отрицательным результатом ПЦР УХ был выявлен при использовании метода ИФА, причем у 11 он был диагностирован при использовании двух серологических исследований – IgG к БТШ-60 Ch. trachomatis и секреторных IgA в семенной плазме (табл. 2). Если бы диагностика проводилась с использованием только серологических исследований, позволяющих определять IgG, IgA к Ch. trachomatis, то специфические антитела были бы выявлены у 4 (36,4%) больных, у 7 (63,6%) оставшихся серонегативными пациентов хламидийная инфекция была бы отвергнута. Кроме того, у 2 серопозитивных пациентов (IgG 1:50 и IgA 1:50, у другого IgG 1:200 и IgA 1:200) определялись антитела классов как IgG, так и IgA к Ch. trachomatis, что позволяло предположить активно протекающую инфекцию. Еще у двух выявлены только антитела класса IgG, причем в низких титрах – 1:50, антитела класса IgА не были выявлены. Это часто расценивается врачами как результат перенесенной инфекции, и хламидийная этиология заболевания отвергается. Поэтому при наличии в анамнезе УХ обследования нужно проводить с использованием большего спектра направленных на выявление УХ серологических реакций.

Важным в выявлении персистирующей хламидийной инфекции у 11 пациентов стало определение наряду с антителами класса IgG к БТШ-60 Ch. trachomatis секреторных IgA к Ch. trachomatis в семенной плазме. При этом у четырех пациентов отсутствовали сывороточные антитела классов IgG и IgA к Ch. trachomatis. Полученные данные не противоречат таковым зарубежных авторов о корреляции повышения уровня IgA Ch. trachomatis в семенной плазме с повышением титра антител БТШ-60 Ch. trachomatis в сыворотке крови [11]. Иммунный ответ на БТШ-60 очень важен для развития хронического негонококкового уретрита. Предполагается, что хронический НГУ – это не закономерное продолжение персистенции хламидий в уретре, а аутоиммунное заболевание, спровоцированное первичным присутствием этой инфекции, и для его дальнейшего развития не требуется наличия самого микробного агента [12].

Результаты проведенных нами исследований не только подтверждают предположение о важной роли Ch. trachomatis в развитии хронического простатита, но и о необходимости для исключения хламидийной природы простатита использования целого спектра серологических исследований, включая определение IgA семенной плазмы и IgG БТШ-60 сыворотки крови. Повышение уровня секреторных IgA к C. trachomatis в семенной плазме при хроническом простатите свидетельствует о том, что первый и самый важный иммунный ответ на хламидийную инфекцию является местным. Высокая информативность определения секреторных IgA к Ch. trachomatis в семенной плазме и антител классов IgG и IgA к Ch. trachomatis показана в ряде зарубежных исследований [9]. Так, по мнению K.A. Redgrove et al., иммунные клетки могут не только инициировать хроническое воспаление, приводящее к пролиферации эпителиальных клеток, ремоделированию тканей и рубцов, но и быть причиной развития аутоиммунных реакций [13]. Применение ИФА для выявления антител к хламидиям с дифференцировкой специфических иммуноглобулинов A, M и G важен для определения стадии и характера течения хламидийной инфекции.

Титры антител при хламидиозах относительно невысоки. В промежутке между 1-й и 3-й неделями после проявления первых симптомов болезни последовательно возникают родоспецифические IgМ-АТ, IgA-АТ, IgG-АТ, а в ряде случаев в этот период их удается определить одновременно. IgM являются ранним маркером инфекции и определяются уже через 5 дней после начала заболевания, пик их приходится на 1–2 недели, и они полностью исчезают через 2–3 месяца независимо от проведенного лечения. Секреторные IgA вначале выявляются в семенной плазме и влагалищном отделяемом, но при этом отсутствует корреляция с содержанием сывороточных IgA, которые появляются через 10–14 дней после начала заболевания – обычно параллельно появлению IgG, только на более низком уровне, и свидетельствуют о прогрессировании заболевания. Уровень IgA обычно снижается к 2–4-му месяцам в результате успешного лечения. При реинфекциях их уровень вновь возрастает. Если уровень IgA-антител не падает после проведенного лечения, то это указывает на неэффективность лечения и формирование хронической формы инфекции. IgA служат маркером как свежей, так и манифестированной хронической формы инфекции. Определение IgA более информативно в качестве маркера активной стадии хламидийной инфекции или в мониторинге эффективности лечения, т.к. эти антитела короткоживущие (5–8 дней) и имеют небольшой период полураспада. В то же время или с небольшой задержкой могут быть определены IgG-АТ. IgG – доминирующий класс иммуноглобулинов в сыворотке крови, составляющий до 90% всех антител IgG, определяются через 15–20 дней после начала заболевания, а период их полураспада – 23 дня. После перенесенной инфекции они могут определяться в низких концентрациях в течение многих лет. При реинфекции или реактивации наблюдается заметное увеличение уровня IgG-антител (бустер-эффект), который у нелеченых пациентов сохраняется неизменным. Высокие уровни антихламидийных IgG-антител диагностически важны при хронической инфекции и реактивном артрите (болезни Рейтера).

Специфичность ИФА – 92–99%, чувствительность – 98%. Иммунные реакции организма возможны, когда хламидии находятся в форме элементарных телец. При неблагоприятных условиях жизненный цикл хламидий может замедляться (до нескольких месяцев) или останавливаться, например, на стадии инициальных телец, когда образуются т.н. аберрантные ретикулярные тельца, что приводит к персистирующей инфекции. Эти формы продуцируют минимальные количества хламидийных структурных антигенов, но продолжают синтезировать и освобождать БТШ. Целесообразна постановка ИФА не только на наличие IgA, IgM, IgG, но и для определения IgG- к БТШ-60 хламидий [14, 15].

Таким образом, серологическое обследование 20 пациентов с отрицательным результатом ПЦР-диагностики позволило нам выявить полиморфизм серологических ответов и подтвердить утверждение об отсутствии одного метода диагностики, позволяющего определить хламидийную этиологию хронического простатита. Только комплексное обследование больных с использованием прямых методов определения возбудителей (ПЦР) и непрямых (серологических) исследований (ИФА) позволяет улучшить качество диагностических поисков для этой категории больных.

Заключение

Определение секреторных IgA к Ch. trachomatis в семенной плазме позволило выявить хламидийную природу хронического простатита у 20 (51,3%) из 39 пациентов. Это служит доказательством того, что степень инфицированности урогенитального тракта у мужчин не может быть установлена только с помощью прямых методов выявления возбудителя. Выявление у 11 (55%) из 20 больных хроническим простатитом антител класса IgG к БТШ-60 Ch. trachomatis указывает на высокую частоту при этом заболевании персистирующей хламидийной инфекции. Для исключения хламидийной природы хронического простатита определение только антител классов IgG и IgA к Ch. trachomatis может быть недостаточным ввиду возможности серонегативного ответа. Поэтому эти исследования должны дополняться определением секреторных IgA к Ch. trachomatis семенной плазмы и сывороточных антител класса IgG к БТШ-60. Определение уровня последних важно для исключения персистирующей хламидийной инфекции.


About the Autors


Corresponding author: V.А. Molochkov – MD, Prof., Head of the Department of Dermatovenereology and Dermatooncology, Moscow Regional Scientific Research Clinical Institute n.a. M.F. Vladimirsky, Moscow, Russia; e-mail: vlmolochkov@yandex.ru


Бионика Медиа