The effect of a new amino acid agent on protein metabolism, the intensity of lipid peroxidation and the state of the antioxidant system in experimental protein-energy deficiency


DOI: https://dx.doi.org/10.18565/pharmateca.2020.12.86-90

L.I. Shevchenko, Kh. Ya. Karimov, T.R. Alimov, O. V. Lubentsova, M.N. Ibragimov

Republican Specialized Scientific and Practical Medical Center of Hematology, Fergana Branch of the Tashkent Medical Academy, Tashkent, Uzbekistan
Background. Until now, despite the achievements of modern medicine, the problem of correcting homeostasis in critical conditions accompanied by protein-energy deficiency remains relevant. In this regard, the creation of new, more effective methods of treatment is of great importance. At the Scientific Research Institute of Hematology and Blood Transfusion (Republican Specialized Scientific and Practical Medical Center for Hematology) of the Ministry of Health of the Republic of Uzbekistan, a new drug has been developed; it contains amino acids and an energy substrate with antioxidant properties, which allows not only to restore protein metabolism disorders, but also inhibit lipid peroxidation processes, restore the state of the antioxidant system (AOS), eliminate disturbances in energy metabolism and electrolyte balance.
Objective. Evaluation of the effectiveness of the new blood substitute on body weight, the state of protein metabolism, as well as the intensity of lipid peroxidation (LPO), the state of the antioxidant system (AOS) under the conditions of protein starvation.
Methods. The experiments compared with the Infezol-40 were carried out on 30 male rabbits using a protein starvation model. The intensity of lipid peroxidation, the activity of antioxidant defense enzymes, and the total antioxidant status were investigated.
Results. The results obtained showed that the new amino acid blood substitute effectively restores body weight, protein metabolism as good as the foreign analogue Infezol-40, and also has a more pronounced antioxidant effect compared to the Infezol-40.
Conclusion. The new domestic amino acid blood substitute effectively restores body weight, protein metabolism as good the foreign analogue Infezol-40, and also has a more pronounced antioxidant effect compared to the Infezol-40.
Keywords: blood substitute, amino acids, protein starvation, lipid peroxidation, antioxidant system, total antioxidant status

Введение

Несмотря на значительные достижения современной медицины, продолжает оставаться актуальной проблема коррекции гомеостаза при критических состояниях, сопровождающихся белково-энергетической недостаточностью. На сегодняшний день за рубежом разработан огромный арсенал средств коррекции энергетических и пластических ресурсов, способных к оптимизации деятельности физиологических систем организма и ускорению процессов восстановления при критических состояниях. Высокая стоимость таких зарубежных препаратов ограничивает их широкое применение в медицине.

Известно, что универсальным механизмом приспособления клетки к изменяющимся в результате заболеваний, связанных с белково-энергетической недостаточностью, условиям считается перестройка обмена веществ и энергии [3, 12, 13]. Зарубежные препараты отвечают основным требованиям, предъявляемым к современным аминокислотным растворам, но не все из них содержат антиоксиданты биоэнергетического действия, необходимые для жизнедеятельности клетки в интенсивной терапии критических состояний [11].

В связи с этим в Научно-исследовательском институте гематологии и переливания крови МЗ РУз был разработан новый препарат, содержащий аминокислоты и энергетический субстрат, обладающий антиоксидантными свойствами, что позволяет не только восстанавливать нарушения белкового обмена, но и ингибировать процессы липопероксидации, восстанавливать состояние антиоксидантной системы (АОС), устранять нарушения энергетического метаболизма и электролитного баланса [4].

Целью данной работы стало изучение эффективности действия нового кровезаменителя при белковом голодании на массу тела, состояние белкового обмена, а также интенсивности перекисного окисления липидов (ПОЛ), состояния АОС.

Методы

Модель белкового голодания воспроизводили у кроликов-самцов массой 2,2±0,2 кг. Животные были разделены на четыре группы. В первую (контроль) вошли интактные животные, которые содержались на стандартном виварном корме: пшеничная мука (12%), сухари (10%), просо (6%), крупа овсяная (36%), молоко (8%), солевая смесь (10%), рыбная мука (25%), дрожжи кормовые (2,5%).

Во второй группе животные содержались на безбелковом рационе питания в течение 10 дней. Безбелковый рацион включал крахмал и сахарозу (75%), растительное масло (15%), рыбий жир (1%), витаминную (4%), солевую смесь (5%).

После 10 дней подопытных кроликов первой и второй групп декапитировали. Третья и четвертая группы животных содержалась в течение 10 дней на безбелковом рационе питания. Начиная с одиннадцатого дня им внутрибрюшинно вводили изучаемые препараты: в третьей группе – препарат «Инфезол-40», в четвертой – новый аминокислотный кровезаменитель в дозе 10 мл/кг массы тела в течение 10 суток. Препараты вводили из расчета в дозе 10 мл/кг массы тела в течение 10 суток.

Были исследованы показатели белкового обмена: масса тела, общий белок сыворотки крови, альбумин и глобулин сыворотки крови с использованием тест-систем HUMAN (Германия) на полуавтоматическом биохимическом анализе BA88A (Mindray, Китай). Белковые фракции определяли турбидиметрическим методом и методом электрофореза по общепринятой методике [2].

Была оценена интенсивность ПОЛ по содержанию в крови малонового альдегида (МДА), диеновых кетонов и диеновых коньюгатов. Уровень МДА определяли по методу Л.И. Андреевой и соавт. (1988) [1, 5]. Расчет продуктов производили, используя коэффициент молярной экстинции, и выражали в нмоль/мл пл. (в плазме) и нмоль/мг Нb (в эритроцитах).

В эксперименте были изучены общий антиоксидантный статус, активность ферментов антиоксидантной защиты и гематологические показатели.

Исследовали активность ферментов антиоксидантной защиты: каталазы (КТ), супероксиддисмутазы (СОД), глутатионредуктазы (ГР) и глутатионпероксидазы (ГПО).

Активность СОД определяли по методу В.Г. Мхитряна и соавт. (1978). Активность рассчитывали по проценту торможения (Т%) восстановления тетразолиевого синего в щелочной среде. Активность фермента выражали в усл. ед/мин/мг белка.

Активность ГПО определяли по накоплению окисленного глутатиона (GSSG) в результате разложения липоперекисей. Активность фермента выражали в усл. ед/мин/мг гемоглобина (Hb)/мин.

Активность ГР эритроцитов определяли в реакционной среде фосфатного буфера при длине волны 340 нм и по убыли НАДФН, выражали в мкМ НАДФН2/мин/г Hb, согласно С.Н. Власовой и соавт. (1990) [5].

Активность КТ определяли по методу М.А. Королюка и соавт. (1998), принцип которого основан на способности Н2О2 образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс. Измерения проводились при длине волны 410 нм.

В плазме крови кроликов было изучено состояние общего антиоксидантного статуса (АОС) методом иммуноферментного анализа (ИФА, ELISA) с использованием тест-систем Cayman (США). Измерения результатов ИФА производили на микропланшетном фотометре MR96A (Mindray, Китай).

Цифровые данные подвергались статистической обработке по методу Манна–Уитни и по Стьюденту с применением специального пакета программ на персональном компьютере при помощи программы Excel и Biostat. Критерием статистической достоверности служило p<0,05.

Результаты исследования

Проведенные исследования показали, что у кроликов при белковом голодании масса тела животных снижалась на 31,5%. Концентрация общего белка понизилась на 18,3% (p1<0,0001), содержание альбумина – на 28,0% (р1<0,0001). При белковом голодании во второй группе содержание белковых фракций 2–5 было ниже на 25,0% (р1<0,05), 44,0% (р1<0,0001), 50,9% (р1<0,0001) и на 35,5% (р1<0,0001) (табл. 1).

88-1.jpg (107 KB)

После применения нового кровезаменителя наблюдалось восстановление массы тела и белкового обмена (табл. 1). Как видно из табл. 1, введение нового кровезаменителя приводило к восстановлению массы тела кроликов после введения нового кровезаменителя, которая также восстанавливалась до исходной величины и была на 34,1% больше в четвертой группе по сравнению со второй (p<0,0001).

При применении нового кровезаменителя при белковом голодании содержание общего белка в плазме крови кроликов повысилось до исходного уровня на 21,3% (p2<0,0001), а после введения препарата Инфезол-40 – на 20,7% (р2<0,0001) (табл. 1). Восстановление массы тела и общего белка свидетельствует об эффективности действия нового кровезаменителя на белковый обмен, не уступает зарубежному аналогу.

После введения нового кровезаменителя содержание альбумина повысилось на 30,5% (р2<0,05), что сопоставимо с результатами после применения препарата Инфезол-40, после введения которого концентрация альбумина была выше на 29,3% (p2<0,02) (табл. 1).

У кроликов после инфузии нового кровезаменителя было также отмечено повышение фракций 4 и 5 глобулинов на 43,9 (p<0,01) и 37,6% соответственно, а после применения препарата Инфезол-40 – на 37,8 и 39,7% соответственно (табл. 1). Фракции 2 и 3 глобулинов за 10 дней питания препаратами во всех случаях не претерпевали значительных изменений, причем содержание фракции 3 даже немного статистически незначимо уменьшилось.

Белки фракций 4 и 5 синтезировались более активно, чем фракций 2 и 3, но их содержание в конце курса применения кровезаменителя не превысило общего уровня глобулинов. В целом восстановление глобулинов протекало более медленно, чем альбуминов. После применения нового кровезаменителя значения фракций глобулинов были на сопоставимом уровне с результатами после применения препарата Инфезол-40 в третьей группе.

Таким образом, при белковом голодании можно было наблюдать понижение количественных значений основных параметров, характеризующих белковый обмен.

Сравнение результатов исследования влияния нового кровезаменителя с эффектом от применения Инфезола-40 показало, что они примерно одинаково восстанавливали массу тела и белковый обмен в течение 10 суток.

Исследования ПОЛ при белковом голодании показали, что содержание МДА было в 1,3 раза (p1<0,0001), диеновых кетонов – в 1,4 (p1<0,05) и диеновых коньюгатов – в 1,9 раза выше (p1<0,0001) (табл. 2).

89-1.jpg (106 KB)

При белковом голодании общий АОС понизился в 1,5 раза (р1<0,01) (табл. 3), а также наблюдалось понижение активности ферментов АОС: КТ – в 1,4 раза (p1<0,01), СОД – в 1,4 (p1<0,0001), ГР – в 1,2 (p1<0,01), ГПО – в 1,4 раза (p1<0,05) (табл. 2).

После применения нового аминокислотного препарата в отношении кроликов показатели ПОЛ снижались и были ниже по сравнению с контрольной группой. Так, содержание МДА было ниже в 1,6 раза (на 36,7%; p2<0,0001), диеновых кетонов – в 1,5 (на 38,4%; p2<0,02) и диеновых конъюгатов – в 1,8 (на 43,5%; p2<0,0001), а по сравнению с инфузией препарата Инфезол-40 содержание МДА было ниже на 32,1% (p3<0,0002), диеновых кетонов – на 28,6% (p3<0,05) и диеновых конъюгатов – на 31,6% (p3<0,0002) (табл. 2).

При исследовании АОС было установлено, что после лечения новым аминокислотным препаратом он восстанавливался до исходных величин. После инфузии нового кровезаменителя общий АОС повысился в 1,5 раза, или на 54,5% (р2<0,0001), что было на 30,8% (р3<0,01) выше, чем после применения препарата Инфезол-40 (табл. 3).

89-2.jpg (55 KB)

Также после инфузии нового кровезаменителя восстанавливалась активность ферментов АОС: КТ была выше, чем при белковом голодании, на 46,8% (p2<0,0001), СОД – и на 28,9% (p2<0,0001), ГР – на 27,8% (p2<0,0002) и ГПО – на 68,2% (p1<0,05).

При этом относительно результатов, полученных после применения препарата Инфезол-40, после применения нового кровезаменителя у кроликов активность КТ была выше на 34,9% (p3<0,01), СОД – на 27,9% (p3<0,05), ГР – на 15% (p3<0,05), ГПО – на 33,3% (p3<0,01) (табл. 2). Полученные данные свидетельствуют о том, что новый кровезаменитель, содержащий аминокислоты и биоэнергетический антиоксидантный комплекс, обладает более выраженным антиоксидантным действием по сравнению с препаратом Инфезол-40.

Он способен к восстановлению массы тела, белкового обмена, к подавлению процессов липопероксидации и повышению антиокислительной активности клеток крови при спонтанном индуцированном окислении, вызванном белково-энергетической недостаточностью.

Обсуждение

Анализ полученных данны показал, что использование нового аминокислотного кровезаменителя при белково-энергетической недостаточности способствовало более выраженному восстановлению показателей ПОЛ, которые были ниже: содержание МДА – на 32,1%, диеновых кетонов – на 28,6%, диеновых коньюгатов на – ё31,6%, а также повышению значений показателей антиоксидантного статуса активности ферментов АОС: КТ – на 34,9%, СОД – 27,9%, ГР – на 15%, ГПО – на 33,3%, по сравнению с использованием широко известного в медицинской практике препарата Инфезол-40.

При сравнительном изучении нового аминокислотного препарата показатели массы тела и белкового обмена восстанавливались примерно одинаково, не уступая зарубежному аналогу – препарату Инфезол-40.

Включение в состав антиоксиданта биоэнергетического действия способствует активной защите клеток от окислительной деструкции и повышает антиокислительную активность клеток при спонтанном и индуцированном окислении, вызванном белково-энергетической недостаточностью. Применение нового аминокислотного препарата при белково-энергетической недостаточности способствует восстановлению функции и жизнеспособности клеток, тем самым снижая вероятность наступления летальных исходов.

Выводы

Новый отечественный аминокислотный кровезаменитель эффективно восстанавливает массу тела, белковый обмен, не уступая зарубежному аналогу Инфезол-40, а также обладает более выраженным антиоксидантным действием по сравнению с зарубежным аналогом Инфезол-40.

Источник финансирования. Иссле-дование выполнено по гранту: ПЗ-20170928603 “Разработка нового многофункционального средства метаболической коррекции гомеостаза при критических состояниях различных заболеваний”.


About the Autors


Corresponding author: Timur R. Alimov, Cand. Sci. (Med.), Hematologist, Senior Researcher of Research Grant, Medical Laboratory Scientist at the Laboratory of Medical Genetics, Republican Specialized Scientific and Practical Medical Center of Hematology, Tashkent, Uzbekistan; altirar@mail.ru
Address: 42A, Bunyodkor Avenue, Tashkent 100097, Uzbekistan


Бионика Медиа