Genetic biomarkers of various ischemic stroke subtypes


DOI: https://dx.doi.org/10.18565/pharmateca.2020.3.96-99

G.M. Minibaeva, L.B. Novikova, T.V. Viktorova

Bashkir State Medical University, Ufa, Russia
Background. Ischemic stroke (IS) is one of the leading causes of death and disability worldwide. There are atherothrombotic (ATS) and cardioembolic (CES) subtypes of IS. For timely diagnosis and prediction of outcomes for different IS subtypes, an important task is to identify the most informative biomarkers, including genetic ones.
Objective. Search for genetic biomarkers to predict the outcome of various IS subtypes based on an analysis of the CD46 gene expression level.
Methods. The study used RNA samples of 79 unrelated individuals, including 21 patients with CES, 20 with ATS, 21 with transient ischemic attack, and 17 healthy individuals. In order to study the role of the CD46 gene in the development of IS, we performed a molecular genetic analysis of its expression level.
Results. The important role of the CD46 gene in the development of ATS has been shown. A comparative analysis with the control group showed that ATS men showed a significant increase in the CD46 gene expression level, while in women, on the contrary, the the CD46 gene expression level was significantly lower.
Conclusion. The data obtained indicate the important role of the CD46 gene in the development of this pathology and the possibility of its use as a genetic biomarker of the atherothrombotic IS.
Keywords: ischemic stroke, atherothrombotic stroke, cardioembolic stroke, biomarkers, CD46 gene

Введение

Одной из наиболее важных медико-социальных проблем здравоохранения являются сосудистые заболевания головного мозга, значимость которых определяется их высокой долей в структуре заболеваемости и смертности, а также значительными показателями трудовых потерь и инвалидизации населения [1]. Ежегодная смертность от инсультов в России превышает аналогичный показатель в мире и составляет 175 случаев на 100 тыс. населения в год. Перенесенный инсульт налагает особые обязательства на членов семьи больного, значительно снижая их трудовой потенциал, и ложатся тяжелым социально-экономическим бременем на общество в целом [2]. Важно и то обстоятельство, что в последние годы имеет место тенденция к «омоложению» инсульта. Наблюдается увеличение его распространенности среди лиц трудоспособного возраста, как у мужчин, так и у женщин [3]. Все это обусловливает повышенный научный интерес к проблеме инсульта, поиску путей его профилактики и эффективного лечения [4].

Хотя инсульт в 1,25 раза чаще развивается у мужчин, суммарное число женщин, умерших от этого заболевания, существенно выше, что, возможно, связано с большей продолжительностью жизни женщин [5]. В структуре церебрального инсульта преобладают ишемические поражения головного мозга, доля которых достигает 65–75% [6].

Выделены различные подтипы ишемического инсульта (ИИ), что определяется разницей в механизмах формирования ишемии. Так, в случае развития атеротромботического подтипа инсульта (АТИ) его причиной служит атеросклероз церебральных артерий крупного или среднего калибра. Этот тип ИИ формируется ступенеобразно и характеризуется нарастанием симптоматики на протяжении нескольких часов или суток. Кардиоэмболический подтип инсульта (КЭИ) развивается вследствие полной или частичной закупорки эмболом артерии мозга и характеризуется высокой смертностью. Для своевременной диагностики и прогнозирования исходов при разных подтипах ИИ важной задачей является выявление наиболее информативных биомаркеров, в т.ч. генетических.

Различия в патогенезе подтипов ИИ определяются особенностями молекулярно-генетических механизмов, вовлеченных в этот процесс.

G.C. Jickling et al. (2010, 2012) установили, что мРНК гена CD46 может использоваться в качестве потенциального маркера для дифференциальной диагностики разных подтипов ИИ, т.к. CD46 является частью каскада комплемента, который регулирует развитие воспаления, наиболее характерного для АТИ [7, 8].

Цель настоящего исследования состояла в поиске генетических биомаркеров для прогнозирования исходов различных подтипов ИИ на основе анализа уровня экспрессии CD46.

Дизайн исследования

Дизайн исследования заключался в сравнении уровня экспрессии CD46 в образцах периферической венозной крови в группах с разными подтипами ИИ и в зависимости от пола.

Методы

В работе были использованы образцы РНК 79 неродственных индивидов, проживавших на территории Республики Башкортостан.

В группу обследованных больных разными подтипами ИИ вошли 21 пациент с КЭИ и 20 – с АТИ. Кроме того, в качестве группы сравнения был обследован 21 пациент с диагнозом «транзиторная ишемическая атака» (ТИА).

Контрольную группу составили 17 практически здоровых индивидов, сопоставимых с больными по возрасту, полу и этнической принадлежности, без хронических заболеваний, в т.ч. без патологии сердечно-сосудистой системы в анамнезе.

С целью изучения роли гена CD46 в развитии ИИ нами проводился молекулярно-генетический анализ уровня его экспрессии. Образцы РНК выделяли из плазмы периферической венозной крови больных тризоловым методом. Целостность РНК оценивали электрофорезом в 1%-ном агарозном геле по соотношению интенсивностей полос, соответствовавших 28S и 18S рРНК. Синтез первой цепи кДНК проведен с помощью реакции обратной транскрипции. Анализ осуществлен методом ПЦР на термоциклере «RotorGeneQ» фирмы «QIAGEN» в режиме реального времени с использованием специфических олигонуклеотидных праймеров фирмы «Евроген».

Статистическую достоверность различий между группами оценивали с помощью Т-теста Стьюдента, критерий Краскела–Уоллиса (k) или Манна–Уитни для каждого гена в каждой группе по сравнению с контрольной группой [9].

Данное исследование одобрено Комитетом по медицинской этике ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России.

Результаты исследования

При исследовании уровня экспрессии гена CD46 у пациентов с ТИА и в зависимости от подтипов ИИ статистически значимых различий по сравнению с контрольной группой не выявлено. Так, уровень экспрессии гена CD46 в контрольной группе составил -0,34, при ТИА -0,75, при АТИ 5,11, при КЭИ -1,67 (k=2,945; р=0,40) (рис. 1). Отсутствие различий между исследуемыми группами обусловлено большой дисперсией (разбросом) показателя экспрессии в группах больных АТИ и КЭИ между мужчинами и женщинами.

97-1.jpg (56 KB)

С учетом различных патогенетических механизмов развития ТИА и ИИ у мужчин и женщин нами проведен анализ зависимости экспрессия гена CD46 от половой принадлежности.

Оказалось, что у мужчин группы больных ТИА уровень экспрессии гена CD46 составил 0,19, тогда как в группе контроля его значение было ниже, а именно -1,23 (U=12; p=0,094; рис. 2). У женщин наблюдалась противоположная картина: при развитии ТИА уровень экспрессии изучаемого гена был ниже, чем в группе контроля (-0,75 и 1,16 соответственно; U=12; p=0,088; рис. 3). В обоих случаях различия не достигли уровня статистической значимости, что, возможно, связано с небольшим объемом выборки пациентов с ТИА.

Однако при исследовании уровня экспрессии гена CD46 у пациентов с АТИ выявлены статистически значимые различия между мужчинами и женщинами (рис. 2, 3).

98-1.jpg (111 KB)

Так, у мужчин с АТИ наблюдалось значительное повышение уровня экспрессии гена CD46 по сравнению с группой контроля (7,18 и -1,23 соответственно; t=-2,53; p=0,024). Напротив, у женщин имела место обратная динамика: уровень экспрессии гена CD46 у больных оказался существенно ниже по сравнению с группой контроля (-2,11 и 1,16 соответственно; t=4,54; p=0,002).

Мы предполагаем, что выявленные различия между мужчинами и женщинами могут быть связанными с особенностями молекулярно-генетических механизмов воспаления в эндотелии сосудов, вовлеченных в патогенез развития АТИ, в частности гена CD46.

При анализе уровня экспрессии гена CD46 у больных КЭИ статистически значимых различий между больными и контролем, а также в зависимости от половой принадлежности не наблюдалось. Так, уровень экспрессии у мужчин составил 0,09, в контрольной группе – 1,23 (t=-0,67; p=0,516). В группе женщин уровень экспрессии гена CD46 оказался ниже, чем в контрольной группе (-5,92 и 1,16 соответственно; t=2,17; p=0,092), но различие также не было статистически значимым.

Полученные результаты можно объяснить отсутствием выраженных атеросклеротических изменений сосудов и воспалительного процесса в эндотелии при КЭИ.

Интересно отметить, что у женщин с наличием когнитивных расстройств уровень экспрессии гена CD46 оказался существенно выше, чем в контрольной группе (1,85 и 1,16 соответственно; U=7; р=0,042). У мужчин с наличием когнитивных расстройств различий в экспрессии изучаемого гена с контрольной группой не выявлено (U=49; р=0,423).

Обсуждение

ИИ известен своей высокой смертностью и заболеваемостью. Следовательно, необходимо определить более точные маркеры для различных подтипов инсульта, поскольку это будет иметь значение для своевременного выбора соответствующей терапии. Было продемонстрировано, что мРНК CD46 была в списке 40 мРНК, которые могут быть использованы в качестве потенциальных маркеров для различения подтипов ИИ. Среди этих 40 мРНК – CD46, по- видимому, непосредственно вовлечен в патофизиологию различных подтипов ИИ. CD46 является частью каскада комплемента, который регулирует воспаление, важнейший патологический процесс в патофизиологии ИИ. В этом исследовании мы показали, что уровень мРНК CD46 значительно изменяется при различных подтипах инсульта. Это наблюдение согласуется с современной литературой, которая предполагает, что атеросклероз, лежащий в основе патологии инсульта, в значительной степени обусловлен процессом воспаления [10].

Следует отметить, что дисфункция эндотелиальных клеток является важным признаком атеросклероза, и ранее сообщалось, что уровень белка CD46,повышен в атеросклеротической бляшке [11]. Следовательно, изменение регуляции мРНК CD46, обнаруженное у пациентов, согласуется с современными данными.

Заключение

Различия в патогенезе подтипов ИИ определяются разными генетическими механизмами, вовлеченными в развитие данного заболевания. Ранее было показано, что при ИИ происходит нарушение регуляции гена CD46 [12, 13]. В связи с этим изучение роли CD46 при различных подтипах ИИ представляется актуальной научной задачей.

В результате проведенного исследования нами показана важная роль гена CD46 в развитии атеротромботического подтипа ИИ. Сравнительный анализ с контрольной группой показал, что у мужчин с АТИ наблюдалось значительное повышение уровня экспрессии гена CD46, тогда как у женщин, напротив, уровень экспрессии гена CD46 оказался существенно ниже. Однако у женщин с когнитивными расстройствами уровень экспрессии гена CD46 оказался достоверно выше.

Полученные результаты свидетельствуют о важной роли гена CD46 в развитии данной патологии и возможности его использования в качестве генетического биомаркера атеротромботического подтипа ИИ.


About the Autors


Corresponding author: Guzel M. Minibaeva, Postgraduate Student at the Department of Neurology IPGE, Bashkir State Medical University, Ufa, Russia; e-mail: Guzel-hisamieva@rambler.ru; ORCID: https://orcid.org/0000-0002-2078-6931 
Address:3, Lenin str., Ufa 450008, Russian Federation


Бионика Медиа