Введение

Высокая доля сперматозоидов с повреждениями ДНК не всегда коррелирует с обычными параметрами спермограммы. В то же время фрагментация ДНК сперматозоидов может оказывать влияние на ранние этапы эмбрионального развития, особенно на формирование бластоцисты и частоту наступления беременности в циклах экстракорпорального оплодотворения/интрацитоплазматической инъекции сперматозоида [1, 2, 5].

Фрагментация ДНК сперматозоидов является относительно недавно открытой, интенсивно исследуемой в последнее десятилетие причиной мужского бесплодия и отцовского эффекта нарушений раннего эмбрионального развития. Причиной разрывов ДНК считают процессы изменения структуры хроматина в ходе сперматогенеза и апоптоз [5].

Фрагментация ДНК сперматозоидов – нарушение целостности их ДНК, связанное с упаковкой патологического хроматина или дефицитом протамина, оказывающее негативное влияние на репродуктивные исходы при естественном зачатии или в программах вспомогательных репродуктивных технологий. У бесплодных мужчин процент сперматозоидов с нарушением целостности ДНК – более 30%, у здоровых фертильных мужчин – менее 15%.

Одним из современных принципов терапии инфертильности у мужчин, обусловленной фрагментацией ДНК, является коррекция окислительного стресса, восполнение витаминов, микроэлементов и низкомолекулярных пептидов [3, 4, 6].

Целью настоящего исследования стало изучение влияния комплекса терапии для коррекции окислительного стресса на поврежденную ДНК сперматозоидов.

Материал и методы

В исследовании участвовали 27 бесплодных супружеских пар, у которых при нормальных показателях спермограммы мужа отмечались либо отсутствие беременности у супруги (бесплодный брак от 1 года до 8 лет), либо неоднократно происходившие выкидыши, либо многократные отрицательные попытки искусственного оплодотворения.

Критериями включения в исследование служили:

• отсутствие клинических и лабораторных признаков воспалительного процесса в половых железах;
• отсутствие инфекций репродуктивного тракта, диагностированных методом полимеразной цепной реакции;
• отсутствие аутоиммунных реакций против сперматозоидов, сопровождающихся выработкой антиспермальных антител;
• концентрация сперматозоидов не менее 10 млн/мл;
• отсутствие эякуляторных нарушений;
• отсутствие выраженной соматической патологии.

Исследование эякулята проводили в соответствии с требованиями ВОЗ [10]: оценивали концентрацию, подвижность и долю нормальных форм, методом MAR определяли процент сперматозоидов, покрытых антиспермальными антителами. Оценку степени фрагментации ДНК определяли с помощью TUNEL-теста, общую антиокислительную активность спермы (ОАА) – по обесцвечиванию радикал-катиона ABTS.

Все пациенты с выявленным высоким процентом фрагметации ДНК получали терапию в течение трех месяцев.

Одним из наиболее перспективных веществ для коррекции окислительного стресса является убихинон (коэнзим Q10) – компонент цепи переноса электронов и непосредственный участник процесса окислительного фосфорилирования [8]. Убихинон определяется в хорошо измеряемых концентрациях в сперме, где он выполняет важные метаболические и антиокислительные функции [9].

Многокомпонентная биологически активная добавка к пище (БАД) «Синергин»* является средством, которое разрабатывалось непосредственно для решения проблемы фрагментации ДНК и представляет собой сбалансированный комплекс, содержащий убихинон, а также β-каротин, ликопин, рутин, витамины С и Е.

Мужчины исследуемых пар в возрасте от 25 до 48 лет (средний возраст – 32±1,6 года) получали комплекс «Синергин» по 2 капсулы во время еды в течение 3 месяцев. Такая продолжительность курса связана с периодом сперматогенеза (72 дня).

Полученные лабораторные данные обрабатывали методами вариационной статистики при помощи t-критерия Стьюдента для независимых и парных значений, χ2 и критерия знаков.

Результаты

Всем пациентам исследуемой группы (27 человек) проведен анализ эякулята, при этом были оценены основные параметры, характеризующие подвижность и жизнеспособность сперматозоидов: процент сперматозоидов с поступательным движением, процент живых сперматозоидов и жизнеспособность сперматозоидов через 4 часа.

Анализ стандартных показателей спермограммы показал, что после приема комплекса «Синергин» в течение 3 месяцев быстрая подвижность сперматозоидов (А) выросла на 26,5%, количество сперматозоидов с медленным поступательным движением (В) уменьшилось на 17,6%, а количество нормальных форм возросло на 11,6% (р>0,5; табл. 1).

Параметры свободнорадикального гомеостаза эякулята обследованных мужчин до и после приема комплекса «Синергин» представлены в табл. 2.

При этом отмечена высокая достоверность изменений в сторону снижения процента фрагментации ДНК (на 35,9%) и увеличения ОАА на применение данного комплекса (р<0,05).

По нашим данным, применение «Синергина» в течение 3 месяцев привело к снижению уровня сперматозоидов с фрагментацией ДНК практически до уровня фертильных мужчин (менее 15%).

Оценка окислительного стресса подразумевает определение как интенсивности свободнорадикальных процессов, так и антиоксидантного статуса. Сперма обладает большим набором антиоксидантов со сходным механизмом действия, поэтому их изолированное определение не всегда соответствует актуальному состоянию антиокислительных систем. Более предпочтителен анализ ОАА, который позволяет дать обобщенную оценку неферментативного звена антиоксидантной защиты и применяется в качестве вспомогательного теста в диагностике мужской инфертильности [7]. Нами констатировано более чем двукратное уменьшение этого показателя при бесплодии (1,21 нМ/мл), что свидетельствует об истощении антиокислительного потенциала эякулята при репродуктивной патологии. Использование комплекса «Синергин» оказывало положительное действие, которое заключалось в достоверном повышении величины ОАА в эякуляте.

Основным результатом нашего исследования в парах c идиопатическим бесплодием (n=27) явилось зарегистрированное наступление 3 беременностей на протяжении 5 месяцев наблюдения, завершившихся срочными родами.

Обсуждение

Согласно полученным результатам обследования пациентов, был сделан вывод, что высокое содержание сперматозоидов с повреждениями ДНК не всегда коррелирует с обычными параметрами спермограммы.

«Синергин» зарекомендовал себя как препарат выбора при мужском бесплодии, связанном с повышенным уровнем фрагментации ДНК сперматозоидов. Следует отметить, что 3 месяца – оптимальный срок для улучшения морфологических параметров сперматозоидов. Прием антиоксидантного комплекса «Синергин» приводит к снижению количества сперматозоидов с фрагментацией ДНК практически до уровня фертильных мужчин (менее 15%), а также достоверно повышает величину ОАА в эякуляте.

Выводы

Прием препарата «Синергин» в течение 3 месяцев приводит к снижению количества сперматозоидов с фрагментацией ДНК на 35,9%, способствует коррекции окислительного стресса эякулята.

Эффект терапии проявляется уже через месяц приема препарата, максимальный эффект наблюдается через 3 месяца.

Используемый препарат не вызывал аллергических реакций и других побочных явлений.

Полученные результаты позволяют рекомендовать применение «Синергина» в комплексной терапии идиопатического бесплодия, включая использование вспомогательных репродуктивных технологий, и считать эти рекомендации патогенетически обоснованными.